鋳型ssDNAとプライマーssDNAの存在下、プライマーの3'ヒドロキシル基に相補鎖を合成する（5'→3'合成活性）ポリメラーゼ。同時にssDNA特異的な3'→5'エキソヌクレアーゼ活性を持っている。DNAフラグメントの末端の平滑化に用いられる。

3'→5'分解活性	5'→3'合成活性

遺伝子工学において、この合成活性とエキソヌクレアーゼ活性を利用し、突出末端から平滑末端へ変換するために用いられる。

• 5'突出末端　→　合成活性によって埋められる（fill-in）
• 3'突出末端　→　エキソヌクレアーゼ活性によって削られる。

その他の方法として、一本鎖部分をヌクレアーゼで消化する方法がある。（S1 nucleaseなど）

• 末端の平滑化
• Taq DNAポリメラーゼI
• Pfu DNAリガーゼ

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