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tdt活性 [2013/06/09 09:08] (現在)
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 +======TdT活性======
 +TdT(terminal deoxynucleotidyl-transferase)活性。2本鎖DNAの平滑末端の3'​末端にヌクレオチドを1つだけ付加する活性。
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 +=====TaqとPfu=====
 +{{ bio:​tdt_activity.png|TaqとPfuの生成物の違い}}
 +
 +PCRで用いられるTaqなどがTdT活性をもっている。平滑末端の3'​-OHにヌクレオチドを1つだけ付加するため、PCR産物も3'​突出となる。基質としてdNTPを用いてもアデニンが選択的に付加される。
 +(PfuのようにTdT活性を持たない酵素は、PCR産物も平滑末端となる。)
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 +=====ライゲーションにおける影響=====
 +平滑末端同士をつなぐブラントライゲーションの場合は、TdT活性による突出末端がライゲーション効率を落としてしまうため、[[T4 DNAポリメラーゼ]]などで[[末端の平滑化]]を行うと良い。一方、[[T-ベクター]]を用いた[[TAクローニング]]は、この突出したAを活用してライゲーションする方法である。
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 +{{tag>​酵素 実験プロトコル PCR}}